酶底物法 以其快速、简便、准确的特点检测大肠杆菌，较其他方法更加简便和精准并且无需验证。
在国家标准<GBT5750.12一2006生活饮用水标准检验方法>中介绍了大肠菌群和大肠杆菌酶底物法。大肠菌群酶底物法是指在选择性培养基上能产生β一半乳糖昔酶(β-D-galactosidase)的细菌群组，该细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中总大肠菌群的方法。大肠杆菌酶底物法是指在选择性培养基上能产生p一半乳糖昔酶(β-D-galactosidase)分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，并能产生压葡萄糖醛酸酶(β一ghicuronidase)分解荧光底物释放出荧光产物，使菌落能够在紫外光下产生特征性荧光，以此技术来检测大肠埃希氏菌的方法为大肠埃希氏菌酶底物法。 

酶底物法之所以可以入选国家标准，是由于根据相关研究报道，几乎所有的大肠菌群都有β-D-半乳糖普酶β-D-galactosidase)活性，94%一97%的大肠杆菌具有β-D-葡糖醛酸糖普酶(β-D-一glucuronidase)活性，而且水体和食品中都缺少这两种酶。因此，基于这两种酶的水体和食品中大肠菌群和大肠杆菌的检测方法得到了迅速的发展。最近报道的一种安培生物传感器应用对氨基酚β-D-毗喃半乳糖苷（PAPG)作为底物，能够在60一7min内检测1000 cfu/ml的大肠杆菌，采用预培养步骤可将灵敏度提高约一百倍。